已經(jīng)普遍到數(shù)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室的ELISA技術(shù)，有著重復(fù)性穩(wěn)定及吸附性能好等特點(diǎn)。今天上海恒遠(yuǎn)給大家?guī)?lái)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)講座，ELISA試劑盒的五大重要點(diǎn)分析。
1. 靈敏度的要求
根據(jù)我公司技術(shù)人員的分析：如果待測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高，則對(duì)靈敏度要求相對(duì)小一些。如果待測(cè)樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問(wèn)題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的，低于這個(gè)值因?yàn)榕c曲線是個(gè)“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實(shí)驗(yàn)誤差，所以達(dá)不到理想的效果。建議選擇試劑盒時(shí)，應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫(xiě)的靈敏度。
2. 標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見(jiàn)模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
3. 灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
4. 測(cè)試過(guò)程請(qǐng)注意：
① 建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
② 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。
③ 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
④ 酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
5. 常用的表示結(jié)果方法
① 定性測(cè)定
② 半定量測(cè)定，結(jié)果一般以滴度表示。
③ 定量測(cè)定，即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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