血清可溶性白介素的檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.了解sIL-2R檢測(cè)的基本原理

2.掌握sIL-2R檢測(cè)的方法的臨床意義。

實(shí)驗(yàn)原理

sIL-2R可與細(xì)胞膜表面的受體（IL-2R）競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IL-2，從而成為一種免疫抑制物質(zhì)。在正常人血清和尿液中可檢出低水平的sIL-2R，在某些疾病發(fā)生時(shí)如器官移植、排斥反應(yīng)、病毒性感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷和自身免疫病等，sIL-2R在血清和其他體液中的水平增高，且與病情、病程密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心法測(cè)定原發(fā)性肝癌患者血清sIL-2R水平。（夾心法原理參見(jiàn)實(shí)驗(yàn)五免疫酶技術(shù)）

即： 抗體-——待檢血清——抗體——酶標(biāo)抗抗體——顯色

實(shí)驗(yàn)用品

1.材料、試劑：待測(cè)人血清、IL-2Rα陽(yáng)性、陰性參考血清、IL-2Rα單抗、兔抗IL-2Rα多克隆抗體、酶結(jié)合物（HRP-抗兔IgG）、顯色A液、B液、PBS洗滌液、終止液。

2.器具：吸管、滴管、試管、48孔聚苯乙烯反應(yīng)板、50μl微量移液器、恒溫箱（370C）

實(shí)驗(yàn)方法

預(yù)步驟：先用一定濃度的IL-2Rα單抗包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱過(guò)夜，次日取出甩盡液體備用。

（1）微量移液器分別加待檢血清、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照各50μl于1、2、3孔中，370C水浴箱溫育40min。

（2）PBS液洗板3次，每次3min，甩干。

（3）每孔加入兔抗IL-2Rα多抗，370C水浴箱溫育30min。

（4）用PBS液洗板3次，每次3min，甩干

（5）每孔加入酶結(jié)合物（HRP-抗兔IgG）2滴，370C水浴箱溫育30min。

（6）每孔分別加入顯色A液、B液各1滴，混勻。370C水浴箱溫育5-10min。

取出肉眼觀察結(jié)果。如待檢血清溶液與陽(yáng)性對(duì)照一致均為藍(lán)色，表明待檢血清為sIL-2R陽(yáng)性血清。